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http://bdtd.unoeste.br:8080/jspui/handle/jspui/1091
Tipo do documento: | Dissertação |
Título: | Adição de proteína plasmática a associada à prenhez (PAPP-A) durante a maturação in vitro aumenta o IGF-1 biodisponível e modula o perfil transcricional de complexos cumulus-oócitos e embriões bovinos |
Título(s) alternativo(s): | Addition of pregnancy-associated plasma protein-A (PAPP-A) during in vitro maturation increases bioavailable IGF-1 and modulates transcriptional profile of bovine cumulus-oocyte complexes and blastocysts |
Autor: | Giroto, Alan Brunholi |
Primeiro orientador: | Castilho, Anthony César de Souza |
Primeiro membro da banca: | Emanuelli, Isabele Picada |
Segundo membro da banca: | Puelker, Raquel Zaneti |
Resumo: | A protéina sérica associada à prenhez (PAPP-A) é capaz de modular a biodisponibilidade do IGF-1 (fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1) pela quebra das ligação com as proteínas de ligação do IGF (IGFBPs). O objetivo foi avaliar como a adição da PAPP-A durante a maturação in vitro (MIV) afetou a biodisponibilidade de IGF-1, a abundância de transcritos nos oócitos e células do cumulus e blastocistos, a produção embrionária e a sobrevivência pós aquecimento. Foi realizada a MIV de 24 h em complexos cumulus oócitos (CCOs – 20/grupo) oriundos de abatedouro, em meio TCM199 livre de soro, com adição de PAPP-A (100 ng/mL; grupo PAPP-A) ou sem (controle). O IGF-1 foi quantificado no meio de maturação e os CCOs maturados foram utilizados na fertilização e cultivo in vitro. Oócitos e células do cúmulus foram separados; e blastocistos foram congelados para a realização da expressão gênica. Taxa de clivagem e produção de blastocistos foram calculados como porcentagem e transformados para arco seno. Dados de expressão gênica foram normalizados com a média do grupo de controle. Os resultados foram analisados por test t, porém a criopreservação embrionária foi testada por Qui-quadrado (JMP software, SAS). Diferenças foram consideradas significativas quando p ≤ 0,05. O grupo PAPP-A apresentou 27% mais concentração de IGF-1 biodisponível. Na produção in vitro de embriões, não encontrou-se diferença na taxa de clivagem, produção e sobrevivência embrionária. Apenas o gene TXNRD1 mostrou maior expressão nos oócitos do grupo PAPP-A. No entanto, nas células do cumulus PAPP-A, o VNN1 e HDAC2 apresentaram maior expressão, enquanto os genes AGPAT1, AGPAT9, FASN, CASP3, EGFR, HAS2, IMPDH1 e MTIF3 apresentaram menor expressão. Nos blastocistos PAPP-A, os genes CPT2, CASP9, DNMT3A, TFAM e KRT8 apresentaram maior expressão, enquanto os genes ATF4, CASP3 e IFITM3 apresentaram menor expressão. Em conclusão, a adição de PAPP-A durante a MIV aumentou o IGF-1 biodisponível, mas não influenciou a produção e a sobrevivência embrionária após desvitrificação. No entanto, o aumento do IGF-1 biodisponível pode melhorar a competência embrionária através da modulação da expressão gênica em oócitos, células do cúmulus e blastocistos. |
Abstract: | In this study we aimed to evaluate how PAPP-A addition during in vitro maturation affected the IGF-1 quantification, transcript abundance related to cumulus oocyte complexes (COCs) and blastocysts quality, embryonic yield, as well as post-warming survival. We matured COCs through a 24 h treatment of TCM199 serum-free medium, either with PAPP-A supplementation (100 ng/mL; PAPP-A group) or without (control). Maturation medium was collected for IGF-1 quantification, and matured COCs were used for in vitro fertilization and culturing. The PAPP-A group exhibited 1.27 times higher IGF-1 concentrations than control. A comparison of in vitro embryo production across the groups found no difference in cleavage rate, embryonic yield, and survival, 3 and 24 h post-cryopreservation. In PAPP-A oocytes, only TXNRD1 was up-regulated. However, in PAPP-A cumulus cells, VNN1 and HDAC2 were up-regulated, while AGPAT1, AGPAT9, FASN, CASP3, EGFR, HAS2, IMPDH1, and MTIF3 were down-regulated. Finally, in PAPP-A blastocysts, CPT2, CASP9, DNMT3A, TFAM, and KRT8 were up-regulated, while ATF4, CASP3, and IFITM3 were down-regulated. We concluded that PAPP-A addition increased IGF-1 but did not influence embryonic yield and survival. Nevertheless, elevated IGF-1 could improve embryo competence through modulating expression of genes involved with lipid metabolism, oocyte competence and apoptosis in COCs and blastocysts. |
Palavras-chave: | proteína de ligação do fator de crescimento semelhante à insulina, complexos cumulus-oócito, produção in vitro de embriões, criopreservação, bovinos. insulin-like growth factor-binding protein, cumulus-oocyte complexes, in vitro embryo production, cryopreservation, cattle. |
Área(s) do CNPq: | CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA |
Idioma: | por |
País: | Brasil |
Instituição: | Universidade do Oeste Paulista |
Sigla da instituição: | UNOESTE |
Departamento: | Mestrado em Ciência Animal |
Programa: | Mestrado em Ciência Animal |
Citação: | Giroto, Alan Brunholi. Adição de proteína plasmática a associada à prenhez (PAPP-A) durante a maturação in vitro aumenta o IGF-1 biodisponível e modula o perfil transcricional de complexos cumulus-oócitos e embriões bovinos. 2018. 60f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) - Universidade do Oeste Paulista, Presidente Prudente, 2018. |
Tipo de acesso: | Acesso Aberto |
URI: | http://bdtd.unoeste.br:8080/jspui/handle/jspui/1091 |
Data de defesa: | 25-Mai-2018 |
Aparece nas coleções: | Mestrado em Ciência Animal |
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